济南格艾特仪器设备有限公司
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一些细胞和组织可在悬浮状态下生长,但相当一部分哺乳动物细胞需要表面贴壁。因此,用于提供细胞体外培养环境的培养瓶、培养板和培养皿除了具有良好的透明度和无毒、无菌外,还需经表面改性处理使之能够贴壁、分裂和生长。
细胞培养瓶特征
厚度均匀,底部无畸变;
密封盖/滤膜盖(0.22μm疏水膜);
设计的瓶盖可快速旋转;
侧面可叠放,更有效地利用培养箱;
无毒,无DNA/RAN酶;
伽马射线消毒灭菌。
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细胞培养瓶的分类:
培养瓶的瓶颈也有多种样式,有直颈、斜颈、角度颈、三角形、矩形。
直颈:可以减少培养基因晃动而流到瓶盖里;
斜颈:易于倾注,移液管或者细胞刮容易进入瓶体;
角度颈:移液管或者细胞刮易于进入瓶身,并且可减少培养基因晃动而流到瓶盖;
三角形:移液管或细胞刮更易达到瓶角,宽底增加稳定性;
矩形:斜颈的矩形培养瓶瓶底至瓶颈是一个坡度设计,易于倾注,移液管或者细胞刮容易进入瓶体,大部分斜颈瓶都有一个裙边以增加稳定性。直颈和角度颈的矩形培养瓶整个瓶底都是培养面,节省空间并减少培养基因晃动而流到瓶盖。
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培养瓶和培养皿的区别
培养瓶适合长期培养、传代、作为种子细胞。 不易污染。
培养皿和培养板适合在各种实验中选用,临时培养。
培养面积T25约为25,T75为75。6孔板、10/孔。12孔板4/孔。
培养瓶和培养皿的区别在于,安全系数的高低、培养细胞数量的多少。个人感觉培养瓶的安全系数更高,操作也比较方便。培养瓶瓶可以用来做相对大规模的培养或比较容易被污染的细胞。而培养皿比较适合小规模的培养或做一些对照分析实验。
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细胞在细胞培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。传代培养也是一种将细胞保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮性细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。具体操作步骤如下:
将长满细胞的细胞培养瓶中原来的培养液弃去。
加入0.5—1ml 0.25%胰酶溶液,使瓶底细胞都浸入溶液中。
瓶口塞好橡皮塞,放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移,原贴壁的细胞逐渐趋于圆形,在还未漂起时将胰酶弃去,加入10ml培养液终止消化。观察消化也可以用肉眼,当见到瓶底发白并出现细针孔空隙时终止消化。一般室温消化时间约为1—3分钟。
用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液,分到另外两到三瓶中,实践培养液塞好橡皮塞,置37℃下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。
以上是细胞培养瓶在细胞传代中的应用,消化液的配制方法如下:称取0.25克胰酶蛋白酶(活力为1:250),加入100ml无Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解,滤器过滤除菌,4℃保存,用前可在37℃下回温。胰酶溶液中也可加入EDTA,使终浓度达0.02%。
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